Inne
>> Pozytywna selekcja komórek ludzkich z pełnej krwi metodą EasySep
EasySep - pozytywna lub negatywna immunomagnetyczna selekcja komórek, nie wymagająca użycia kolumn. Procedura ta wykorzystuje swoiste przeciwciała monoklonalne, bardzo małe FACS-kompatybilne magnetyczne nanocząsteczki oraz specjalny magnes. Wszystko to sprawia, że metoda ta jest łatwa, szybka, wygodna, a przy tym bardzo efektywna (uzyskuje się wysoką czystość komórek). Niewątpliwą zaletą tej metody jest także jej ekonomiczność, gdyż nie wymaga zakupu drogich kolumn.
W przypadku selekcji pozytywnej pożądane komórki pozostają w probówce natomiast wszystkie inne (niezwiązane z nanocząsteczkami) są wylewane. W celu osiągnięcia wysoce czystej populacji komórki są przemywane dwa lub więcej razy. Zebranie komórek polega jedynie na wyjęciu probówki z magnesu (rysunek poniżej).
W przypadku selekcji negatywnej pożądane komórki (niezwiązane z nanocząsteczkami) w momencie odwrócenia magnesu są przelewane do osobnej probówki.
Podsumowując,
cechy metody EasySep:
- BARDZO ŁATWA I SZYBKA - cała procedura trwa około 1h
- EFEKTYWNA – wysoki odzysk i czystość wyizolowanych komórek (nawet do 99%)
- EKONOMICZNA – nie ma potrzeby zakupu drogich kolumn
- FACS-KOMPATYBILNA – z uwagi na swoje niewielkie rozmiary nanocząsteczki nie przeszkadzają w dalszej analizie z użyciem cytometru przepływowego
- UNIWERSALNA – pozytywna lub negatywna selekcja teoretycznie dowolnego typu komórek z dowolnego gatunku (istnieje możliwość zaprojektowania własnego koktajlu).
Magnesy wykorzystywane w metodzie EasySep:
EasySep Violet Magnet (nr kat. 18000) – najmniejszy z magnesów. Zaprojektowany do standardowych probówek polistyrenowych 12 x 75mm. W ciągu jednej separacji może być analizowanych 2,0 x 108 komórek (lub w przypadku rzadkich komórek, np. CD34 – 5 x 108)
Big EasySep Magnet (nr kat. 18001) - został zaprojektowany do standardowych probówek polistyrenowych 17 x 100mm (14ml). W ciągu jednej separacji może być analizowanych 8,25 x 108 komórek (lub w przypadku rzadkich komórek, np. CD34 – 2x 109). Magnes ten nadaje się do pracy z 4,5 ml pełnej krwi (podczas jednej izolacji).
“Easy50” EasySep Magnet (nr kat. 18002) – największy z magnesów, nadający się do izolacji komórek z dużych objętości krwi, PBMC czy próbek leukaferezy. Zaprojektowany do standardowych probówek 50 ml. Magnes ten nadaje się tylko do izolacji metodą negatywną.
RosetteSep – niemagnetyczna metoda izolacji komórek bezpośrednio z pełnej krwi, wykorzystująca wirowanie w gradiencie gęstości. Jest to metoda negatywna polegająca na sieciowaniu niepożądanych komórek z krwinkami czerwonymi (tworzą się wówczas tzw. immunorozety). Po wirowaniu w gradiencie gęstości (np. Ficoll) immunorozety opadają na dno probówki, a pożądane komórki znajdują się na granicy faz.
Metoda RosetteSep jest:
- PROSTA - nie wymaga użycia magnesu, kolumn oraz innego specjalistycznego sprzętu
- SZYBKA – cała procedura trwa krócej niż 1h
- ŁATWA – jednostopniowa izolacja bezpośrednio z pełnej krwi
- PRAKTYCZNA – wyizolowane komórki nie są związane z przeciwciałami i mogą być od razu użyte do dalszych badań
- EFEKTYWNA – brak utraty komórek w fazie po fikolowej
StemSep – pozytywna lub negatywna, immunomagnetyczna, oparta na kolumnach metoda izolacji komórek. Procedura ta wykorzystuje swoiste przeciwciała monoklonalne, bardzo małe FACS-kompatybilne magnetyczne nanocząsteczki, wysokogradientową, wykonaną ze stali nierdzewnej kolumnę oraz specjalny magnes.
W przypadku selekcji pozytywnej pożądane komórki są znakowane przy użyciu cząsteczek magnetycznych. Następnie zawiesina komórek jest przepuszczana przez kolumnę umieszczoną w magnesie.
W przypadku selekcji negatywnej pożądane komórki nie są związane ani z przeciwciałami, ani z cząsteczkami magnetycznymi.
